葡萄糖氧化酶活性的定义:在pH为5.6、温度为35℃、氧合作用下，每分钟催化1乌摩尔葡萄糖转化为葡萄糖酸的酶的量，为酶活性单位，用Titr表示。
葡萄糖氧化酶法原理:葡萄糖氧化酶是一种好氧脱氢酶，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸。用过量的氢氧化钠中和产生的葡萄糖酸，然后用盐酸反滴定法得到葡萄糖酸的产量，酶活水平根据葡萄糖酸的产量表示。
(1)样品稀释剂的制备
葡萄糖氧化酶法:先称取1g样品(精确到0.0001g)放入臼中，加入少量磷酸盐缓冲液研磨10分钟(研磨至没有大颗粒)，转移到100ml容瓶中，用磷酸盐缓冲液研磨臼。确保所有的样品都被转移到量瓶中，使其符合体积，并摇匀(以控制酶溶液的浓度约3U/ml)。待测样品溶液在加入磷酸盐缓冲液后三小时内测定。
(2)操作步骤
样品测定:取25.00ml 2%葡萄糖磷酸缓冲溶液放入250ml锥形烧瓶中，放入水浴中35°C预热5分钟，准确加入3.00ml以上测量溶液，立即放入恒温水浴中，接恒压。氧气管(喷嘴进入液体表面)。等待反应20分钟后取出(定时准确)，取出氧气管，用少量水(约5ml)冲洗管口，并立即准确加入50.00ml 0.1mol/L氢氧化钠溶液，摇晃停止反应，但反应溶液转移到300ml烧杯中，用少量无二氧化碳蒸馏水(约10-20ml)清洗锥形烧瓶两次，将所有清洁溶液倒入烧杯中，用磁力搅拌摇匀(不要用其他材料，如玻璃棒搅拌)，用0.1 mol/L盐酸滴定至溶液pH值为8.0(用pH精确测量)，记录盐酸消耗的毫升数。
空白对照:将50.00ml 0.1mol/L氢氧化钠溶液精确移液管放入300ml烧杯中，精确加入25.00ml磷酸盐缓冲溶液和3.00ml酶溶液，用磁力搅拌搅拌均匀，用0.1mol/L盐酸滴定其pH值至8.0(用pH精确测量)，记录盐酸消耗的毫升数。空白化验不添加底物、氧气或加热。
(3)酶活性测定与计算
葡萄糖氧化酶活性单位(Titr, u/g)=△V×N×f×1000×3/(20×3×m)
△V:样品与坯料消耗HCL的体积差
N:用于滴定的盐酸浓度
F:稀释因子(稀释因子)
1000:摩尔与摩尔的换算系数
3:葡萄糖添加量(umol)
20:反应时间，单位为分钟
3:添加酶溶液的体积
M:样品的质量
(1)每次加入氢氧化钠的量对数据的准确性至关重要。每次添加的量必须完全相同(用大腹部移液管)，空白样品和每次测试样品中添加的氢氧化钠浓度是相同的。
(2)每次试验的空白对照与样品的试验时间之差不超过2小时。
(3)样品终止反应后，在20分钟内滴定反应溶液，在加入酶溶液20分钟内滴定空白对照溶液。
(4)由于酶溶液在固定过程中会沉淀，所以每次使用前必须摇一摇，以确保酶溶液混合均匀。
(5)用于测定葡萄糖氧化酶的玻璃仪器，使用前应用洗涤剂清洗，用蒸馏水冲洗，并烘干。
(6)氧气喷嘴保持在液体表面以下，以确保氧气与反应液接触。
为保证数据的准确性和科学性，实验重复3次，取并行相对范围小于5%的数据的平均值分别作为计算数据(空白、样本)。如果没有相对范围小于5%的数据，则必须重新测量。
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